Rendons à César ce qui appartient à César, ce tutoriel a été réalisé à ma demande par Laurent Minet, car je dois l'avouer j'ai toujours semé d'une seule et unique façon et je voulais tester cette technique très efficace du semis à la seringue!!
10
seringues de 10 ml avec embout luer-lock
10
aiguilles de seringues de gros calibre ( 18-14 G). il est judicieux de détruire
le biseau de la pointe de l’aiguille, qui ne sert à rien ici sauf à se blesser
en la manipulant. Un coup de pierre à aiguiser ou de papier de verre fera
l’affaire. Éviter une pince coupante qui risque d’écraser la pointe de
l’aiguille et de la refermer.
Coton
(ouate à démaquiller par exemple)
Pincettes
fines
Solution
désinfectante (0.5% NaDCC par ex) avec détergent (Tween )
Eau stérile
avec détergent (Tween)
Vaporisateur
avec désinfectant (hypochlorite, peroxyde, alcool, …)
Méthode :
1°)
numéroter les seringues (étiquettes autocollantes + papier collant)
2°) rouler
entre les doigts une petite boulette de coton. Ni trop, ni trop peu. Trop, le
coton serait trop tassé dans l’embout d’aiguille, et l’eau passerait mal. Trop
peu, les graines iraient se fourrer entre les fibres du coton mal tassé et
resteraient bloquées. Enfoncer la boulette dans l’embout d’aiguille, replacer
l’aiguille sur la seringue en bloquant le raccord luer lock. Le tout AVEC le
« capuchon » sur l’aiguille. Moins on la manipule, plus elle reste
propre.
3°) les 10
(ou moins) seringues étant prêtes, faire une liste de correspondance « lot
de graines – numéro de seringue ». Noter également le nombre de flacons de
semis qu’on compte faire avec chaque lot, ça servira plus tard pour préparer
les flacons avant le semis, et pour savoir combien de ml d’eau stérile aspirer
dans chaque seringue pour préparer la suspension de graines à semer
4°) les
semences sont mises à tremper depuis quelques minutes (jusqu’à une semaine, si
gardé au frigo) dans quelques (maxi 10) ml d’eau distillée (pas besoin d’eau
stérile à ce stade), un tube par lot. On peut se passer de cette étape, et
transférer directement les graines sèches du paquet à la seringue, mais ça va
un peu moins bien.
5°)
préparer dans deux récipients stériles, la solution désinfectante (Cl sur la
photo) et l’eau stérile, en n’oubliant pas d’ajouter au dernier moment un peu
du détergent de son choix. Sans détergent, ça va vraiment moins bien.
6°) retirer
le piston de la première seringue, ainsi que le capuchon de son aiguille,
verser le contenu du tube (eau + semences) dans le corps de la seringue,
replacer le piston. Ejecter le liquide contenant les graines, dans un récipient
« poubelle », les graines resteront coincées par la boulette de
coton.
7°) Aspirer
quelques ml, selon le volume de graines à stériliser, de la solution de
stérilisation, à travers l’aiguille et le coton. La solution en passant par le
coton et l’aiguille, va tout stériliser, y compris les graines qui repassent
dans le corps de la seringue. Ça peut
etre assez difficile, le coton bien tassé ralentit fortement le passage des
liquides. Un ou deux ml de solution sont souvent suffisants pour une petite
quantité de graines de toute manière.Procéder de même avec toutes les seringues
de la série. Noter l’heure-minute correspondant au remplissage/stérilisation de
la dernière seringue. Laisser les seringues à l’horizontale, pendant un temps
variable selon le type de graines, la solution de stérilisation utilisée, la
quantité de graines, leur état sanitaire, etc… J’utilise souvent entre 15 et 25
minutes, avec le NaDCC à 0.5%.
8°) pendant
que la stérilisation se déroule, noter le nom des croisements à semer, en
commençant par le dernier de la liste de 10 (ou moins), de manière à ce qu’en
empilant les flacons, le premier à semer (le N°1 de la liste) se trouve au
dessus de la pile. Ne pas oublier d’agiter les seringues 2- 3 fois pendant la
période de stérilisation. NE PLUS toucher les aiguilles, qui vont devoir
tremper dans l’eau stérile plus tard, il ne faut pas contaminer le récipient
d’eau stérile. Par précaution, vaporiser une solution antiseptique sur les
seringues, et surtout sur les aiguilles.
9°) une
fois le temps de stérilisation écoulé, éjecter le liquide de la première
seringue dans le récipient « poubelle ». En fonction du tassement du
coton, de la finesse et de la quantité de graines, ça peut être très rapide, ou
vous valoir une belle tendinite au pouce après la cinquantième seringue.
L’expérience fera que vous pourrez juger de la quantité de coton à utiliser, et
donc de son tassement.
10°) aspirer
de l’eau stérile dans la seringue. Le volume dépend de la quantité de graines
et du nombre de flacons à semer. Avec des flacons de 8*11 cm de surface,
j’utilise +/- 1 ml d’eau par flacon. Répéter les étapes 9 et 10 pour chaque
seringue. Une fois l’eau stérile aspirée dans la seringue, la stérilisation
s’arrête, et les graines peuvent rester dans l’eau stérile pendant le temps
qu’il faudra pour arrêter la stérilisation de toutes les autres seringues.
11°)
replacer le capuchon sur l’aiguille, pour dévisser cette dernière de l’embout
luer lock en tournant dans le sens anti horloger.
12°) d’une
main, soulever le coin du couvercle du flacon à ensemencer, et de l’autre,
éjecter le volume approximatif souhaité de suspension de graines stérilisées, sur
la gélose. Refermer, incuber, brûler des cierges anti-contamination.
Il arrive
que des graines restent coincées dans le « bouchon » de coton lors du
retrait de l’aiguille juste avant de semer. Si la quantité ainsi perdue est
jugée trop importante, on peut retirer le coton avec des pincettes stériles, et
rincer ce « bouchon » dans le liquide qui a été transféré dans un des
flacons de semis. Cette manipulation augmente le risque de contamination, mais
permet parfois de sauver des graines très fines, rares et précieuses, comme
dans le cas des semis de Lepanthes.
Après avoir
vidé les 10 seringues, les rincer en aspirant de la solution stérilisante,
remplacer les éventuels bouchons de coton qu’on a du retirer pour en rincer les
graines, ou qui se sont révélés tellement trop tassés qu’ils rendent la manip
pénible. On peut recommencer à semer une seconde série de 10 lots de graines
immédiatement, ou stocker els seringues ainsi rincées dans une boite à l’abri
des poussières jusqu’à la prochaine séance. Il n’est pas inutile de stériliser
(chaleur) le lot de seringues de temps en temps avant de recommencer à semer.
Il faut également les remplacer de temps en temps, car le bout du piston (en
caoutchouc) se laisser aller avec le temps et a tendance à se décrocher pour un
rien.
Avant la
première utilisation de seringues neuves, il est aussi utile d’essuyer
convenablement l’embout du piston et l’intérieur du corps de la seringue, avec
un papier essuie-tout (s’aider d’une pincette), car la plupart des modèles sont
venus stériles et lubrifiés avec un silicone qui a tendance à engluer les
premiers lots de semences si on ne prend pas la précaution de l’éliminer avant
utilisation.
